实验背景：在细胞生物学研究中，单细胞悬液的质量直接影响后续分析与培养结果。传统手动制备小鼠骨骼肌单细胞悬液，不仅操作繁琐、耗时费力，还容易因人为操作差异导致细胞活率低、碎片多。今天分享一套标准化仪器制备方案，流程更高效、结果更稳定，新手也能轻松上手!

实验核心目标：借助单细胞悬液制备仪与配套试剂，将小鼠骨骼肌组织快速解离为形态完整、活率高的单细胞悬液，满足单细胞测序、细胞培养、流式分析等后续实验需求。

实验材料与仪器清单：

1.实验材料：

小鼠骨骼肌组织、骨骼肌组织单细胞解离酶(货号：MJ010)、红细胞裂解液(货号：MJ103)、预冷 PBS 缓冲液、台盘蓝染色液。

2.仪器清单：

无菌手术器械套装(眼科剪、镊子)、单细胞悬液制备仪、高速冷冻离心机、倒置显微镜、无菌 EP 管、精准移液系统。

标准化仪器制备步骤：

1.试剂预处理：

将骨骼肌组织单细胞解离酶置于冰上解冻，全程保持冰浴状态备用，避免酶活性流失。

2.小鼠处理与组织取材：

采用断颈法处死小鼠后，迅速分离出骨骼肌组织，用预冷 PBS 缓冲液反复冲洗，去除表面血液、筋膜等杂质。

称取约 130mg 洁净的骨骼肌组织，剪碎、放入单细胞悬液制备仪的研磨管中，加入所需酶。

3.仪器消化：

采用断颈法处死小鼠后，迅速分离出骨骼肌组织，用预冷 PBS 缓冲液反复冲洗，去除表面血液、筋膜等杂质。

称取约 130mg 洁净的骨骼肌组织，剪碎、放入单细胞悬液制备仪的研磨管中，加入所需酶。

4.红细胞裂解与清洗：

用 3-5 倍体积的红细胞裂解液重悬细胞沉淀，冰上孵育 10 分钟，期间用移液系统轻柔吹打 2-3 次。随后再次以 4℃、300g 离心 5 分钟，弃上清后用预冷 PBS 缓冲液清洗重悬 2 次，去除残留裂解液。

5.细胞重悬与镜检质控：

用适量 PBS 缓冲液重悬细胞沉淀，取少量细胞悬液与台盘蓝染色液按比例混合，滴加至细胞计数板上，通过倒置显微镜观察细胞形态并计算活率。

实验结果与优势：

1.核心结果：

①胞形态：经仪器制备的细胞透亮圆润，形态完整，无明显细胞碎片和组织残渣。

②细胞活率：台盘蓝染色检测显示，活细胞率稳定≥95%，满足高要求实验标准。

③细胞数量：离心后可见明显细胞沉淀，重悬后的单细胞悬液均匀分散，无团聚现象。

2.仪器制备化优势：

①效率提升：组织破碎、酶解消化等步骤通过仪器标准化完成，全程耗时缩短 30% 以上。

②稳定性强：避免手动操作的力度、速度差异，实验结果可重复性高。

③损伤更小：仪器研磨和振荡温和，减少细胞机械损伤，显著提升细胞活率。

仪器化制备方案让小鼠骨骼肌单细胞悬液的制备更高效、更稳定，为后续实验提供可靠的样本保障。